Produk
Kit Deteksi SARS-Cov-2-RT-PCR Lifecosm pikeun 2019-nCoV
Diarepkeun pamakéan
Kit ieu dianggo pikeun deteksi kualitatif koronavirus anyar (2019-nCoV) nganggo swab tikoro, swab nasopharyngeal, cairan lavage bronchoalveolar, sputum. bukti pikeun diagnosis klinis tur treatment.A analisis komprehensif ngeunaan kaayaan dianjurkeun dina kombinasi kalayan manifestasi klinis sabar sarta tés laboratorium lianna.
Prinsip inspeksi
Kit dumasar kana téknologi RT-PCR hiji-léngkah.Kanyataanna, 2019 coronavirus anyar (2019-nCoV) ORF1ab sareng gén N dipilih salaku daérah target amplifikasi.Primer spésifik sareng panyilidikan fluoresensi (panyilidikan gen N dilabélan ku FAM sareng panyilidikan ORF1ab dilabélan ku HEX) dirancang pikeun ngadeteksi RNA coronavirus tipe anyar 2019 dina conto.Kit ogé ngawengku hiji sistem deteksi kontrol internal endogenous (internal control gene usik dilabélan ku CY5) pikeun ngawas prosés ngumpulkeun sampel, RNA jeung PCR amplifikasi, kukituna ngurangan hasil négatip palsu.
Komponén utama
| Komponén | Jilid(48T / Kit） |
| Solusi réaksi RT-PCR | 96µl |
| nCOV primer TaqMan probemixture (ORF1ab, N Gén, RnaseP Gén) | 864µl |
| kontrol négatip | 1500µl |
| nCOV Positip contro（l ORF1ab N Gén） | 1500µl |
Réagen sorangan: ékstraksi RNA atanapi réagen purifikasi.Kontrol négatif/positip: Kontrol positif nyaéta RNA anu ngandung fragmen udagan, sedengkeun kontrol négatip nyaéta cai tanpa asam nukléat.Nalika dianggo, aranjeunna kedah ilubiung dina ékstraksi sareng kedah dianggap tepa.Éta kedah diurus sareng dibuang saluyu sareng peraturan anu relevan.
Gén rujukan internal nyaéta gén RnaseP manusa.
Kaayaan neundeun sareng tanggal béakna
-20 ± 5 ℃, nyingkahan katirisan terus-terusan sarta thawing leuwih ti 5 kali, valid pikeun 6 bulan.
Instrumén lumaku
Kalayan FAM / HEX / CY5 sareng alat PCR fluoresensi multi-kanal anu sanés.
Sarat spésimén
1. Jenis spésimén anu tiasa dianggo: swab tikoro, swab nasopharyngeal, cairan lavage bronchoalveolar, sputum.
2. Ngumpulkeun spésimén (téhnik aseptik)
Swab pharyngeal: Ngusap amandel sareng tembok pharyngeal posterior ku dua swab sakaligus, teras beuleum sirah swab dina tabung uji anu ngandung larutan sampling.
Sputum: Saatos pasien ngagaduhan batuk anu jero, kumpulkeun sputum anu batuk dina tabung uji tutup screw anu ngandung larutan sampling;cairan lavage bronchoalveolar: Sampling ku professional médis.3.Storage sarta angkutan sampel
Spésimén pikeun isolasi virus sareng tés RNA kedah diuji pas mungkin.Spésimén anu tiasa dideteksi dina 24 jam tiasa disimpen dina suhu 4 ℃;anu teu tiasa dideteksi dina 24
jam kudu disimpen dina -70 ℃ atawa handap (upami teu aya kaayaan neundeun -70 ℃, maranéhna kudu
samentara disimpen dina -20 ℃ kulkas).Spésimén kedah ngahindarkeun katirisan sareng thawing salami transportasi.Spésimén kedah dikirim ka laboratorium pas mungkin saatos ngumpulkeun.Upami sampel kedah diangkut dina jarak anu jauh, disarankeun pikeun neundeun és garing.
Métode Tés
1 Ngolah sampel sareng ékstraksi RNA (wewengkon ngolah sampel)
Disarankeun nyandak 200μl sampel cair pikeun ékstraksi RNA.Pikeun léngkah-léngkah ékstraksi anu aya hubunganana, tingal petunjuk kit ékstraksi RNA komérsial.Boh négatif boh négatif
kadali dina kit ieu aub dina ékstraksi.
2 Persiapan réagen PCR (wilayah persiapan réagen)
2.1 Cabut sadaya komponén tina kit sareng ngalembereh sareng campur dina suhu kamar.Centrifuge dina 8.000 rpm pikeun sababaraha detik sateuacan dianggo;itung jumlah réagen anu dibutuhkeun, sareng sistem réaksi disusun sapertos anu dipidangkeun dina tabel ieu:
| Komponén | N porsi (sistem 25µl) |
| nCOV primer TaqMan probemixture | 18 µl × N |
| Solusi réaksi RT-PCR | 2 µl × N |
| *N = jumlah sampel diuji + 1 (kontrol négatip) + 1 (nCOVkontrol positif) | |
2.2 Saatos tuntas Pergaulan komponén, centrifuge keur waktu anu singget mun ngantep sakabeh cairan dina témbok tube ragrag ka handap tabung, lajeng aliquot sistem amplifikasi 20 μl kana tube PCR.
3 Sampling (wilayah persiapan spesimen)
Tambahkeun 5μl tina kontrol négatip jeung positif sanggeus ékstraksi.RNA sampel nu bakal diuji ditambahkeun kana tabung réaksi PCR.
Tutup tabung pageuh tur centrifuge dina 8.000 rpm pikeun sababaraha detik saméméh mindahkeun kana aréa deteksi amplifikasi.
4 PCR amplifikasi (area deteksi amplified)
4.1 Teundeun tabung réaksi dina sél sampel alat, tur nyetel parameter saperti kieu:
| panggung | Siklus angka | Suhu(°C) | Waktos | kumpulansitus |
| Ngabalikeuntranskripsi | 1 | 42 | 10 mnt | - |
| Pra-denaturasin | 1 | 95 | 1 mnt | - |
| Siklus | 45 | 95 | 15s | - |
| 60 | 30s | ngumpulkeun data |
Pilihan saluran deteksi instrumen: Pilih saluran FAM, HEX, CY5 pikeun sinyal fluoresensi.Pikeun rujukan fluoresensi NONE, punten ulah milih ROX.
5 Analisis hasil (Mangga tingal parentah eksperimen unggal instrumén pikeun setting)
Saatos réaksi, simpen hasilna.Saatos analisa, saluyukeun nilai awal, nilai tungtung, sareng nilai bangbarung tina garis dasar dumasar kana gambar (pamaké tiasa nyaluyukeun dumasar kana kaayaan anu saleresna, nilai awal tiasa disetél ka 3 ~ 15, nilai tungtung tiasa disetel ka 5~20, adjustment) dina grafik logaritmik Dina bangbarung tina jandela, garis bangbarung aya dina fase logaritmik, sarta kurva amplifikasi kontrol négatip nyaéta garis lempeng atawa handap garis bangbarung).
6 Kontrol kuantitas (Kadali prosedural kalebet dina tés) Kontrol négatip: Henteu aya kurva amplifikasi anu jelas pikeun saluran deteksi FAM, HEX, CY5.
Kontrol positif COV: kurva amplifikasi atra tina saluran deteksi FAM sareng HEX, Ct value≤32, tapi henteu aya kurva amplifikasi saluran CY5;
Sarat di luhur kudu patepung sakaligus dina percobaan sarua;Upami teu kitu, percobaan teu valid sarta kudu diulang.
7 Penentuan hasil.
7.1 Upami teu aya kurva amplifikasi atanapi nilai Ct> 40 dina saluran FAM sareng HEX tina sampel tés, sareng aya kurva amplifikasi dina saluran CY5, éta tiasa ditilik yén teu aya 2019 coronavirus anyar (2019-nCoV) RNA dina sampel;
.2 Upami sampel tés ngagaduhan kurva amplifikasi anu jelas dina saluran FAM sareng HEX, sareng nilai Ct ≤40, éta tiasa ditaksir yén sampelna positip pikeun coronavirus anyar 2019 (2019-nCoV).
7.3 Upami sampel uji ngagaduhan kurva amplifikasi anu jelas dina hiji saluran FAM atanapi HEX, sareng nilai Ct ≤40, sareng henteu aya kurva amplifikasi dina saluran anu sanés, hasilna kedah diuji deui.Lamun hasil retest konsisten, sampel bisa judged positif pikeun nu anyar
coronavirus 2019 (2019-nCoV).Upami hasil tes ulang négatip, éta tiasa ditilik yén sampelna négatip pikeun coronavirus anyar 2019 (2019-nCoV).
Nilai judgment positif
Métode kurva ROC dianggo pikeun nangtukeun nilai rujukan CT tina kit sareng nilai rujukan kontrol internal nyaéta 40.
Interprétasi hasil tés
1.Each percobaan kudu diuji pikeun kontrol négatip jeung positif.Hasil tés ngan ukur tiasa ditangtukeun nalika kadali minuhan sarat kadali kualitas
2. Nalika saluran deteksi FAM sareng HEX positip, hasil tina saluran CY5 (saluran kontrol internal) tiasa négatip kusabab persaingan sistem.
3. Nalika hasil kontrol internal négatip, upami tabung uji FAM sareng saluran deteksi HEX ogé négatip, éta hartosna sistem ditumpurkeun atanapi operasina salah, tés henteu sah.Ku alatan éta, sampel kudu diuji deui.
